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,免得到时候两眼一黑。”

“二是催化底物的事,齐惠仁今天下午给我打电话了,想要半个月内先送过去一批,他们着急用。”

“我在网上订购了一批仪器,这几天就能到,先送到友良家那里,整备好之后我先给他们合成一批发过去。”

这个事已经提前跟李友良商量好了,现在这个时候不适合在医院科研楼这边合成催化底物,要不然解释起来很麻烦。

而且合成这个催化底物的原料很简单,在哪都能买到,主要的设备就是几台温控仪加上离心机和色谱仪。

高风自掏腰包也没花几个钱,买的二手的设备,能用就行了。

几人商量了一下后,便又开始了之前的实验,在系统给具的实验流程中,单克隆抗体制备过程中的筛选被分为2步。

第一次筛选:

细胞融合后,杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的hat选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤(h)、氨基喋呤(a)和胸腺嘧啶核苷酸(t)。其依据是细胞中的dna合成有两条途径:

一条途径是生物合成途径(“d途径”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,为dna分子的合成提供原料。在此合成过程中,叶酸作为重要的辅酶参与这一过程,而hat培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物,可以阻断dna合成的“d途径”。

另一条途径是应急途径或补救途径(“s途径”),它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(hgprt)和胸腺嘧啶核苷激酶(tk)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸,两种酶缺一不可。因此,在hat培养液中,未融合的效应b细胞和两个效应b细胞融合的“d途径”被氨基喋呤阻断,虽“s途径”正常,但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10d左右会死亡。

第二次筛选:

在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应b淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。

实验到了这一步基本上也到了收尾阶段,第一次筛选操作很简,难点在第二次筛选上:需要将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞(理论上30的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单个细胞)。

这一步的主力是高风和胡嘉然,程松和李友良只能打打下手,忙活到快11点,高风停下了操作,让大家回去休息。

“估计还得2个星期。”高风在心里预估了一下,也有可能更短,程松的水平提高的也很快,李友良现在负责后勤,他也有点分身乏力。

——

第二天

高风和董茜茜查完房好大一会了,才接到气管镜室的电话通知,让昨天那个气管食管瘘的病人下去。

到了气管镜室,梁丛越还把高风拉到了一边,“硬镜你会吗?没见你做过啊,可不敢逞能。”

“真会,其实挺简单的。”高风对着他笑了笑,梁丛越这么问也是因为关心他。

麻醉师一管药下去就把病人给麻翻了,他麻利的插上喉并连接上了呼吸机。高风先拿普通的支气管镜看了一下,常规的留取了图片,这个等会书写气管镜报告的时候要用到。

镜下可以很清楚的看到一个直径约1公分的瘘口,位置在左主支气管距离隆突嵴约2公分处,旁边还有点食物的残渣。

“可以放一个y型支架。”一旁的气管支架材料商出声道。

由于气道支架属于高值耗材,省人民医院用的量还不少,厂家专门给配了个助理,平时谁放支架的时候他在一旁帮帮忙什么的。

高风还是第一次跟这种人打交道,对方很客气,小伙子一口一个老师的叫着,手脚也很麻利,应该是在气管镜室待的时间长了,无菌观念非常过关。

不过气管镜和胃肠镜相对于其他手术操作来讲,要求的环境洁净度并不是特别高,毕竟这都是人体与外界相通的腔隙,并不要求绝对无菌。

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